تمایز سلول بنیادی به استخوان و رنگ آمیزی آلیزارین رد

سلول­هاي بنيادي مزانشيمي از آن دسته سلول­هايي هستند كه در بازسازي بافت استخوان صدمه ديده نقش مهمي را بازي مي­كنند.

از آن جــايي كــه در استراتژيهاي سـلول درمـاني از سـلولهـاي كـاملا تمـايز يافتـه استفاده ميشود اولين قدم در استفاده از سلولهاي مزانشيمي به منظور بازسازي ضايعات استخواني، تمايز آنها به استئوبلاستهـا در شـرايط آزمايشـگاهي مـيباشـد. استخوان منبع اصلی کلسیم و سلولهای پیش ساز در بدن است. در ميـان آزمـونهـاي بيولوژيكي مختلف براي تخمين ميزان فعاليت استئوبلاستها ، رنگ آمیزی آلیزارین رد (Alizarin Red S) یکی از روش های پر کاربرد می باشد. رنگ آمیزی آلیزارین رد رنگ آمیزی است که معمولا برای شناسایی استئوبلست تمایز یافته استفاده می شود. آلیزارین رد یک ترکسب آلی است که به طور اختصاصی ماتریکس معدنی شده در سلول های تمایز یافته به استخوان را به رنگ قرمز رنگ آمیزی می کند. بطوریکه شدت رنگ پذیری  بافت با میزان مواد معدنی موجود در ماتریکس آن ارتباط مستقیم دارد.

یکی از معیارهای مزانشیمی بودن سلول­های بنیادی استخراجی، قابلیت تمایز آنها به بافت استخوانی است بنابراین سلول­ها طی یک بازه زمانی تحت تیمار با محیط تمایزی استخوانی قرار می­گیرند که شامل محیط  DMEM حاوی FBS و فاکتور های اصلی تمایز به استخوان می باشد. این فاکتور ها عبارتند از:

Dexamethasone

β- Glycerol Phosphate

Ascorbic Acid

سلولهای مزانشیمی پس از تیمار با محیط تمایزی استخوان جهت رنگ آمیزی آماده می شوند و پس از طی شدن مراحل رنگ آمیزی  توسط میکروسکوپ اینورت از سلول های تمایز یافته عکسبردلری می شود و نتایج به صورت کیفی گزارش می شود و در صورت استفاده از داربست در کشت سلول نتایج به صورت کمی گزارش خواهد شد.